تبلیغات
دنیای من - رنگ آمیزی گرم
 
دنیای من
من+تو
درباره وبلاگ



مدیر وبلاگ : فتانه آذربایجانی
نظرسنجی
رسانه ی مورد اعتماد شما؟








آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :
شنبه 11 آذر 1391 :: نویسنده : فتانه آذربایجانی

رنگ آمیزی گرم

رنگ آمیزی گرم

این رنگ آمیزی ،باکتری ها به ۲ گروه مهم طبقه بندی می شوند:

۱ـ گروهی که گرم مثبت نامیده می شوند.

۲ـ گروهی که گرم منفی نامیده می شوند.

در رنگ آمیزی گرم ، موارد زیر دخالت دارند :

تفاوت ترکیبات شیمیایی دیواره باکتری ها نظیر پیوند های یونی و گروه های مختلف اسیدی و بازی رنگ ها باعث اختلاف در رنگ اجزای مختلف سلول است.

تفاوت در قابلیت نفوذ پذیری دیواره ها نسبت به الکل که در حلالیت کمپلکس حاصله موثر است.

البته نقش شرایط محیطی ( مانند PH ، مواد غذایی و مرحله رشد باکتری ) نیز در خصایص رنگ پذیری باکتری ها موثر است.برخی از باکتری های گرم مثبت پس از چند روز رشد در محیط غذایی ممکن است به صورت گرم منفی مشاهده می شوند.(گاهی اسیدیته محیط موجب ازبین رفتن رنگ گرم می شود .)با استفاده از روش رنگ آمیزی گرم ، باکتری های گرم مثبت به رنگ بنفش و باکتری های گرم منفی به رنگ قرمز مشاهده می شوند.واکنش گرم با خواص شیمیایی و فیزیولوژیکی باکتری ها مرتبط است و با استفاده از رنگ آمیزی گرم شناسایی آن ها آسان تر می شود.دیواره سلولی باکتری های گرم منفی در مقایسه با دیواره سلولی باکتری های گرم مثبت دارای مقدار زیادی لیپید است.بر اساس نظر سالفون تفاوت رنگ تابع اختلاف در به دام افتادن کمپلکس رنگی کریستال ویوله و ید در دیواره سلول باکتری است.به دلیل خروج آب از دیواره سلولی به توسط رنگ دندانه ،سلول های گرم مثبت پس از تاثیر ید (رنگ دندانه ) مشخص می شوند.الکل باعث جدا شدن لیپید از سلول های گرم منفی شده و از این رو قابلیت نفوذ پذیری افزایش می یابد و دیواره باکتری قابلیت نفوذ پیدا می کند.در نتیجه کمپلکس کریستال ویوله و ید توسط حلال چربی خارج می گردد.باکتری های گرم منفی بعد از شستشو با الکل بی رنگ می شوند . از این رو قبل از بررسی گسترش لام ، زیر میکروسکوپ باید از یک رنگ متضاد استفاده شود. معمولا از سافرانین به عنوان رنگ متضاد استفاده می کنند و در نتیجه باکتری های گرم مثبت به رنگ آبی یا بنفش و باکتری های گرم منفی به رنگ قرمز ظاهر می شوند.روش های متعددی در مورد رنگ آمیزی گرم مورد استفاده است.از آن گروه می توان به روش هوکر ،رنگ آمیزی اصلی گرم ، روش کوپلوف ، روش کوپلوف_برمن و رنگ آمیزی گرم برای افراد کوررنگ ،روش جنسن اشاره کرد ، توسط گری گرسن نیز یک روش سریع برای شناسایی باکتری های گرم مثبت و گرم منفی ابداع شد.گاهی بر اثر عدم رعایت زمان لازم در رنگ آمیزی یا مراحل متفاوت رشد باکتری ها این ارگانیسم ها رنگ اصلی خود را به دست نیاورده و باعث اشتباه در تشخیص می شوند.

رنگ آمیزی اصلی گرم :

اساس این نوع رنگ آمیزی کاربرد 4 نوع ماده شیمیایی است که به ترتیب پس از تثبیت به وسیله حرارت به کار برده می شوند.در نخستین مرحله ، رنگ اولیه یا رنگ اصلی است که عملکرد آن رنگ آمیزی تمام سلول هاست.برای تثبیت بهتر رنگ دومین عامل که لوگول نام دارد و از ترکیب ید و یدور پتاسیم تهیه می گردد، اضافه می شود.سومین مرحله استفاده از رنگ بر است که معمولا الکل یا مخلوط الکل _استون است.بر اساس ترکیب شیمیایی دیواره سلولی باکتری ها ، عوامل رنگ بر میتوانند رنگ اولیه یا اصلی را به طور کامل از سلول پاک کنند و یا این که منحصرا از ساختمان خاصی در سلول رنگ ها را پاک کنند. آخرین مرحله ،کاربرد رنگ زمینه است که رنگی متضاد با رنگ اولیه یا اصلی است.پس از عمل رنگ بری اگر رنگ اولیه از سلول خارج شود ، سلول بی رنگ شده و فرصت ورود رنگ دوم فراهم می شود.به این ترتیب انواع سلول ها یا ترکیبات آن ها می توانند بر پایه رنگی که در سلول باقی می ماند از یکدیگر متمایز گردند.

روش رنگ آمیزی:

1_از باکتری مورد نظر گسترش تهیه کنید.

2_گسترش را در مجاورت هوا خشک کنید.

3_گسترش خشک شده را با حرارت ثابت کنید.

4_چند قطره رنگ کریستال ویوله را به مدت 60 ثانیه روی لام بریزید.

5_گسترش را با جریان ملایم آب شیر یا آبفشان بشویید.

6_چند قطره از محلول ید تهیه شده روی لام ریخته و 60 ثانیه صبر کنید.

7_لام را با آب شستشو دهید.

8_با قطره چکان چند قطره الکل 95 % را روی گسترش بریزید تا موقعی که آخرین قطرات رنگ بنفش از گسترش خارج شود.

9_لام را با آب شستشو دهید.

10_چند قطره رنگ فوشین یا محلول رقیق 1% سافرانین به عنوان رنگ زمینه بیفزایید و صبر کنید تا 2 دقیقه رنگ بر سطح لام بماند.

11_گسترش را با جریان ملایم آب بشویید.

12_صبر کنید تا سطح لام در معزض هوا خشک شود.

13_مشاهده میکروسکوپی لام با عدسی 100 و روغن ایمرسیون انجام می شود.

تفسیر آزمایش:

در این نوع رنگ آمیزی گرم ، باکتری های گرم مثبت به رنگ بنفش و باکتری های گرم منفی به رنگ قرمز مشاهده می شوند.





نوع مطلب :
برچسب ها : رنگ آمیزی نمونه، رنگ آمیزی گرم، گرم مثبت، گرم منفی،
لینک های مرتبط :

یکشنبه 12 آذر 1391 12:34 ب.ظ
سلام، خیلی مفید بود سپاسگذارم
فتانه آذربایجانی

سلام، ممنون پوریا جان.
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر
نظرات پس از تایید نشان داده خواهند شد.